RAW 264.7细胞是一种常用的小鼠单核巨噬细胞系，来源于 Abelson鼠白血病病毒诱导的肿瘤。具有巨噬细胞的许多特性，如吞噬能力、抗原呈递和细胞因子分泌。常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。

RAW 264.7是一种单核细胞/巨噬细胞系，具有松散贴壁的立方形或纺锤形细胞和圆形活细胞。细胞松散附着、堆积并变圆是正常的，尤其是在培养密集时。活细胞可以分离和漂浮，特别是当培养物变得更加融合时。这些未附着的细胞仍然有活力，应通过温和离心保留下来，然后重新加入烧瓶中。不同批次血清的细微差异会导致RAW 264.7细胞或多或少的附着。我们使用未经热灭活的优质血清，因为热灭活可以减少附着因子和生长因子。

【货号】BC-C-MI-001 

【规格】1*10^6个/T25培养瓶(或冻存管) 

【保存】液氮保存，长期

 【产品介绍】

指将这种小鼠单核巨噬细胞系诱导分化为不同功能表型（如促炎的M1型或抗炎的M2型）的过程，常用于研究免疫调节、炎症反应及疾病机制，主要的诱导参数和检测指标以及功能特征如下表所示

细胞预处理：

1、若为冻存细胞：取出1mL冻存管后，迅速放入37℃水浴锅中不断摇晃使其解冻，直至冻存管中无结晶（此过程尽量在2min内完成）；准备15mL离心管，加入2-6mL完培，将冻存管中的细胞悬液移至离心管，1000 rpm离心3~5min；吸弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种至无菌的培养器皿中，轻晃动混匀后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

2、若为培养中的细胞：吸去培养液，加入不含钙镁的PBS，轻轻润洗瓶底1-2次，吸弃PBS；加入0.25%胰酶-EDTA消化液，铺匀瓶底放入培养箱中消化1-2min；倒置显微镜下观察大部分细胞变圆脱落，迅速加入完全培养基终止消化；接种：用DMEM完全培养基(DMEM培养基+10%FBS+双抗)重悬细胞至2-10×10^5/ml，24孔培养板中加入1ml细胞悬液（根据培养容器底面积进行换算），培养6-8h（建议传代安排在早上8-9点，这样有利后续的实验安排）。

3、待细胞贴壁完成汇合度达到80%-90%左右，方可进行后续M1极化操作。吸取培养上清液添加新鲜配制的完全培养基，分别添加200ng/ml的LPS和20ng/ml的Mouse IFN-γ共刺激12h（过夜），次日检测相关结果（M1标记物如：CD80, iNOS, IL-1β, IL-6, CXCL1等，同时细胞形态也会出现如图所示明显的差异性。

A、无菌操作、细胞消化的把控，防止污染以及过度消化对细胞造成影响，进而影响后续实验结果；

B、M1极化的结果与细胞状态、极化的时间以及极化因子的浓度有关联关系，因此在实际操作过程中需要根据实际的现象对实验参数进行微调。