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ELISA试剂盒常见问题整理

1、1个96T试剂盒能测多少个样?

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2、标准品500ml(96T/48T),能够测多少次?

1)单标可以测四次

2)双标可以测两次


3、血液样本如何选择测ELISA?

1、血浆全血标本经抗凝分离后去除血细胞成分即为血浆,主要化学成分测定和凝血项目检测等。

2、血清是血液离休凝固后分离出来的液体,血清与血浆相比较,主要是缺乏纤维蛋白原,某些凝血因子也发生了变化。血清主要用于化学和免疫学等检测。


说明书上一般写血浆和血清都可以检测,根据需要选择,例如:纤维蛋白原检测用血浆样本,血清样本检测纤维蛋白原残留。

来源:刘成玉. 临床检验基础[M]. 2005.P5


4、血液样本发生溶血是否能检测?

轻微溶血勉强可以检测,明显溶血建议重新取样,溶血因红细胞破坏溶解时释放大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA,会导致非特异性显色,干扰测定结果。

来源:

http://www.360doc.com/content/18/1207/05/52645714_799883575.shtml


5、组织样本操作流程:

1) 组织样本必须保持鲜重,如果是冻存的组织,应该室温平行2小时以上,然后用生理盐水冲洗干净,再用滤纸把周围的水分吸干,称重!组织重量不能低于50mg;

2)组织匀浆液选取是PBS(PH=7.2-7.4,浓度为0.01mol/L)匀浆的比例为1:10,相当于1g组织加9ml的匀浆液;

3)组织匀浆后,离心取上清,离心转数为5000转,但不能超过5000转,时间为15分钟;

4) 实验中样本提取的是200mg的样本加1.8ml的匀浆液。


6、组织样本操作中的常见问题:

1)问:从各样品中取了同样大小的肉块吧?具体是取了多少?怎么取的?称重方式吗?之前好像提到过肉块大小的尺寸,是不是用其他方式做到了各样品的起始量的一致?

答:对于组织,不可能确定好每块组织都达到恒定的重量,这个不太现实。都是按照固定的匀浆比例(匀浆比例为10%),相当于1g组织加9ml的匀浆液,重量小的,匀浆液也会少。最终的浓度是不变的!


2)问:测定样品时需要将样品制成液体样本吧?请问是如何做成液体样品的?匀浆吗?如果是匀浆方式的话应该有溶剂的,使用了哪些溶剂呢?

答:匀浆比例在上面已经告诉了,匀浆液采用的是0.01mol的PBS(磷酸盐缓冲液)PH控制在7.2-7.4。


7、ELISA试剂盒操作细节常见问题整理:

1)问:是不是空白对照就是什么都不加?

答:不加样本,不加样本稀释液,不加酶标试剂,其他都可以加。


2)问:样本稀释液是配好的吗?

答:样本稀释液是配好的。


3)问:样本稀释液可以用来直接稀释血清吗?

答:可以的,直接加40ul就可以了。


4)问:洗涤液是浓缩的;是一次配好,还是现配现用?谢谢。

答:浓缩的,现配现用。


5)问:加入的显色液A\B分别是什么物质?作用原理?

答:显色剂A和B,是经典的TMB显色系统。具体原理可以参考免疫方面的教科书。在这里不详细列出。


6)问:终止液是什么物质?如何做到终止反应的?

答:终止液是2mol的硫酸溶剂。终止反应也是和原理相关。这个参考教科书!


7)问:稀释液是什么成分?

答:标准稀释液是PBS(PH=7.2-7.4,浓度是0.01mol/L)。样本稀释液是含有0.5%BSA的PBS(PH=7.2-7.4,浓度是0.01mol/L)。


8)问:需要避光保存的试剂是哪个?

答:需要避光的是显色液B。


9)问:试剂盒从冰箱取出后,室温放置会影响其效果吗?

答:试剂盒在做实验前应该要室温平衡一小时。短时间(3、4小时)没有任何影响。


10)问:样品研磨后是立即离心,还是在4度冰箱里提取几个小时以后再离心?

答:样本研磨后立即离心即可。


补充:5%BSA 封闭液(Blocking Buffer)适用于 Western Blotting、ELISA 以及免疫组化实验中非特异性蛋白结合位点的封闭。


8、样本保存条件和时间怎么选择?

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9、最后如果样本数据没有达到预期效果,不要慌,可以按下面流程排查问题,或者联系公司技术。

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