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BP-DL017

苏木素伊红(HE)染色试剂盒(精装)

规格 100ml
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BP-DL017-100ml ¥395.00元 准现货 EA 加入购物车

商品描述

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苏木素伊红(HE)染色液说明书

【产品组成】

苏木素伊红(HE)染色液是由苏木素染色液、伊红染色液所组成。

【保存条件】

室温,避光,12个月

【产品概述】

苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色,简称HE染色,是病理学常规制片中最基本的染色方法,应用极其广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶,是一种碱性染色剂,它在被氧化后生成苏木素,同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用,能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中,常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质不特殊成分,而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中,细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色,二者形成鲜明的对比,易于观察分析。

苏木素伊红染色液中,苏木素染色液采用自主研发的配方,由进口的高纯度苏木精、氧化剂等组成,不含氧化汞、甲醇等有害物质,对细胞核染色效果好。其特点是不易产生沉淀和金属;应用范围广,可以用于人、动物、畜牧、水产等领域,可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等;苏木素染色液可以重复使用。

【使用方法】

(一)石蜡切片染色

1、切片脱蜡至水

①二甲苯作用2次,每次5~10min。

②(可选)无水乙醇作用2次,每次3~5min。

③95%的乙醇3~5min

④90%的乙醇3~5min

⑤80%的乙醇3~5min

⑥自来水或蒸馏水冲洗1~3min

2、染色

①苏木素染色液染色5~8min

②自来水或蒸馏水冲洗5~10s

③(可选)盐酸乙醇分化2~5s

④自来水冲洗20~30s

⑤蓝化液返蓝20~40s

⑥自来水冲洗30~60s

⑦伊红染色液染色3~5min

⑧自来水冲洗1~5s

2、脱水、透明、封固

①80%乙醇10~20s

②90%乙醇10~20s

③95%乙醇作用2次,每次1~2min。

④无水乙醇作用2次,每次2~3min。

⑤二甲苯透明3次,每次2~3min。

⑥中性树脂封片。

染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色;

角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

(二)冰冻切片染色

1、乙醚-乙醇混合固定液5~10s

2、自来水冲洗2~5s

3、苏木素染色液滴染1~2min(可加热至50℃)。

4、自来水冲洗2~5s

5、(可选)盐酸乙醇分化2~5s

6、自来水冲洗2~5s

7、蓝化液返蓝2~5s

8、自来水冲洗5~10s

9、伊红染色液染色2~5s

10、自来水冲洗1~2s

11、80%的乙醇1~2s

12、95%的乙醇1~2s

13、无水乙醇2~5s

14、苯酚二甲苯(1:3)2~5s

15、二甲苯透明3次,每次2~5s。

16、中性树脂封片

备选方案:

1、无需脱蜡,直接迅速用蒸馏水冲洗 2~3min.

2、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤。

染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色。

(三)细胞染色

1、4%多聚甲醛固定10~20min。

2、自来水冲洗2次,每次2min。

3、蒸馏水冲洗2次,每次2min。

4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤,作用时间应相应缩短。

染色结果:细胞核呈蓝色;细胞质、纤维呈红色

【染色原理】

1、 细胞核染色的原理:

苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是 DNA,在 DNA双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使 DNA 双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易不带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

2、 细胞浆染色的原理:

伊红是一种化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色不染液的 pH 值密切相关。当染色液 pH 值在胞浆蛋白质等电点(4.7~

5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,不胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。

3、 分化作用:

染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在 HE 染色中常用 1%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木素的醌型结构,使组织不色

素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后,必须用 1%盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去,再进行伊红染色,才能保证细胞核不细胞浆染色的分明。

4、 返蓝作用:

分化之后,苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色,立即用水除去组织切片上的酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。

【注意事项】

1、切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。

2、盐酸乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。

3、乙醚-乙醇混合固定液是由乙醚和95%乙醇等量混合而得,再加入适量乙酸,密闭保存。

4、冷冻切片染色时间尽量要短。

5、蓝化液常使用0.2~1%氨水或Scott促蓝液或0.1~1%碳酸锂溶液。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。